薄層層析板常用制備方法供參考

 

薄層層析板制備方法有很多，有手工的，也有機(jī)械的。如果薄層層析板用量較少，可以用手工的，如果用量較大，還是用機(jī)械的更加方便快捷！ 

 

下面先介紹一下薄層層析板配置方法：

  1. 鋪板：手動(dòng)或機(jī)械。手動(dòng)鋪出的板的薄厚與所加的混合后的硅膠量有關(guān)，而機(jī)械鋪出的板的薄厚與機(jī)械所選用的鋼板有關(guān)，可根據(jù)需要來(lái)定。但此過(guò)程中zui關(guān)鍵的是板子邊緣鋪得好壞，手動(dòng)鋪板一定要將玻璃板邊緣硅膠涂勻（我習(xí)慣用兩頭掂法，即板下方的中間墊一物體，兩頭懸空，兩手均勻掂動(dòng)）。而機(jī)械鋪板要注意板與板之間平整性，或者由高到低排列。

  2. 晾干：自然晾干。

  3. 活化：將晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min，取出，放入干燥器中，備用。

  4. CMC－Na溶液的配置：一般其濃度為0.3～0.5％，根據(jù)自己經(jīng)驗(yàn)而定（我習(xí)慣用0.4％的）。具體方法如下：先將預(yù)用的水加熱至60~70℃，然后加入CMC－Na，邊加邊攪拌，使之溶解，即得。

  5. 與硅膠混合：CMC－Na溶液與硅膠的比例為3：1。具體方法如下：先將CMC－Na溶液倒入自動(dòng)攪拌器或研缽中，然后加入硅膠，攪勻即可。若是在研缽中研磨，按一個(gè)方向研磨，自下而上，然后自上而下，以趕盡氣泡為佳。

 

薄層層析板鋪板

    鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)稀：過(guò)稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過(guò)稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過(guò)拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來(lái)判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過(guò)載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大，影響zui大的是展開(kāi)劑的配制和展開(kāi)系統(tǒng)的飽和。

 

點(diǎn)樣

    盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無(wú)水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。

 

展開(kāi)劑配制

    選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開(kāi)劑。不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑?；旌喜痪鶆蚝蜎](méi)有分液的展開(kāi)劑，會(huì)造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的zui高度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。

 

展開(kāi)系統(tǒng)的飽和

    一般使用的是雙槽的展開(kāi)缸，一槽用來(lái)放展開(kāi)劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開(kāi)的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開(kāi)缸的蓋子。讓展開(kāi)劑的蒸氣充滿展開(kāi)缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開(kāi)時(shí)難免要打開(kāi)蓋子把薄層板放入展開(kāi)劑中，不過(guò)對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。 

 

溫濕度的控制

    溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過(guò)在另一展開(kāi)槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。

 

薄層層析板顯色

    噴顯色劑顯色zui重要是有好的霧化器。